尊龙凯时的细胞培养条件如下：气相组成为95%空气和5%二氧化碳，培养温度设定为37℃，使用MEM培养基，添加10%胎牛血清(FBS)和1%青霉素-链霉素(P/S)。A-498细胞系来源于一位52岁肾癌女性患者，由Aaronson S建立。

传代建议：首次传代比例建议为1:2，培养液应每2天更换一次。在运输细胞后，处理和培养至良好状态后，将其用完全培养液灌满并封口，以确保细胞的最佳运输效果。收到细胞时，使用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，并在超净工作台内进行无菌操作。细胞瓶在37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时，以帮助细胞恢复稳定状态，再进行后续处理。显微镜下观察细胞的生长状态，并在不同倍数下拍照保存（建议40x、100x、200x各一张），前三天的照片将作为售后服务的重要依据，未提供照片则默认细胞状态良好。

细胞培养步骤：

a、细胞传代：

当细胞的汇合度未超过80%时，收集瓶中的完全培养液至离心管，保留5ml完全培养基于37℃、5%CO2孵箱中培养。若细胞密度超过80%，则需进行传代，具体步骤如下：

1. 去除培养上清，用不含钙、镁离子的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml 0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态，若细胞大部分变圆并开始脱落，快速将培养瓶移回操作台，轻敲数下后加入至少5ml完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基以重悬细胞。
4. 按1:2的比例将细胞悬液分瓶，加入新的完全培养基至每瓶5-8ml，并放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

b、悬浮细胞传代步骤：

1. 采用半换液法，竖直放置培养瓶于培养箱静置约1小时，轻轻吸去约3ml培养基，再补充3ml完全培养基。若培养基变色缓慢，可直接添加约500μl FBS，传代时可补充5ml培养基，分成两个培养瓶培养。一般传代3次后可进行离心换液。
2. 采用离心换液法时，收集细胞悬液至离心管中，以1000 RPM离心5分钟，弃去上清液后补加1-2ml培养液重悬，再按1:2的比例分配至新T25瓶中，添加6-8ml新配置的完全培养基，以持续保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2到1:5的比例进行。

细胞冻存：当细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次；随后加入约1ml 0.25%胰蛋白酶消化液，用显微镜观察，待细胞收缩变圆后，加入5ml完全培养液以终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落，转移至15ml离心管，1000 RPM离心5分钟；弃去上清液后，加入1ml尊龙凯时的无血清冻存液（货号：C7001），充分混匀后装入冻存管中。将冻存细胞迅速放入-80℃冰箱中，如需转入液氮罐，则需在-80℃冰箱中存放24小时以上再进行转移。

细胞复苏：从液氮中提取细胞冻存管（建议佩戴防护面具），迅速置于37℃水浴中解冻，直至冻存管内无结晶，随后用75%酒精擦拭外壁；将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟；弃去上清液，使用5ml完全培养基重悬细胞，然后接种至T25培养瓶中，在37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。隔天更换新鲜完全培养基以继续培养。

注意事项：有些细胞在运输过程中可能会脱落，这是正常现象。如脱落较多，可将培养瓶内所有培养液收集至离心管，1000 RPM离心5分钟，收集上清作为过渡培养（后期对比培养），沉淀部分添加1-2ml胰酶，轻轻吹打后重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应。再将细胞离心，弃去上清，再用1-2ml完全培养基重悬。接着按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，然后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中进行培养。